中国粮食工业网---粮食行业综合性网站,全面的粮食资讯、粮机展示平台
当前位置: 主页 > 实用技术 >

面粉中偶氮甲酰胺含量的高效液相色谱法测定

时间:2011-12-24 00:52来源:河北农业大学 作者:陈 波,靳保辉,林燕 点击:
陈 波,靳保辉,林燕奎,谢丽琪 (深圳出入境检验检疫局,深圳 518067) 摘 要:面粉中偶氮甲酰胺(azodicarbonamide,ADA)用丙酮提取,提取液氮吹浓缩后用20mmol/L乙酸铵的水溶液定容,并用正己烷脱脂。样液供高效液相色谱仪测定,外标法定量。方法的线性范围

陈 波,靳保辉,林燕奎,谢丽琪
(深圳出入境检验检疫局,深圳  518067)

摘 要:面粉中偶氮甲酰胺(azodicarbonamide,ADA)用丙酮提取,提取液氮吹浓缩后用20mmol/L乙酸铵的水溶液定容,并用正己烷脱脂。样液供高效液相色谱仪测定,外标法定量。方法的线性范围为0~50mg/L(r=1.000),定量下限为1.0mg/kg。在面粉基质中分别添加1.0、2.0、50.0mg/kg 3个水平的偶氮甲酰胺标准品,方法的回收率为80~92%,相对标准偏差小于7%。
关键词:面粉;偶氮甲酰胺;高效液相色谱
 

偶氮甲酰胺(azodicarbonamide,ADA)是一种黄至橘红色结晶性粉末,无臭,常用于小麦粉处理剂及焙烤食品快速发酵剂。ADA为0~ 0.045g/kg时被认为无毒[1]。目前,我国GB2760《食品添加剂使用卫生标准》(含1997~2006年增补品种)规定小麦粉中ADA最大使用量为0.045g/kg。
偶氮甲酰胺作为一种新型面团改良剂,可改善面团的物理操作性质及面制品组织结构[2],在国外已广泛应用。近年来,有研究表明偶氮甲酰胺在面粉中可能代谢产生氨基脲(semicarbazide,SEM)[3]。SEM通常作为呋喃西林(nitrofurazone)的代谢物在兽药残留中检出。硝基呋喃类药物具有致突变和致癌作用, 因此,面粉中偶氮甲酰胺的快速检测方法的开发显得尤为重要。虽然我国已规定偶氮甲酰胺在面粉中的最大使用量,但目前还未见有关于面粉中ADA快速检测方法的报道,也无相关的检测标准。本文建立了面粉中ADA的高效液相色谱分析方法,该方法前处理简单,灵敏度高,能够广泛应用于面粉中ADA的检测。

1 实验部分
1.1 仪器与试剂
Agilent 1100型高效液相色谱仪,配自动进样器和二极管阵列检测器(DAD);振荡器(SA400型,日本Yamato公司);离心机(Universal 32型,德国Hettich公司);旋涡混合器(M37610-33型,美国Barnstead公司);吹氮浓缩仪(Turbo VapLV型,美国Zymark公司)。
水为去离子水;乙腈、二甲基甲酰胺为色谱纯;丙酮、正己烷为分析纯;滤膜(0.20μm, 水相);偶氮甲酰胺标准品(纯度大于99.0%)购自美国Chemservice公司。
1.2 标准溶液配制
准确称量适量标准物质,用二甲基甲酰胺溶解并定容,配制成1000mg/L标准储备液,分装于液相小瓶中,在-80℃冰箱中保存,2周内使用。根据需要用20mmol/L乙酸铵的水溶液配制标准工作溶液。
1.3 样品处理方法
称取面粉1g(精确到0.001g)于50mL塑料离心管中,加入10mL丙酮,室温下振荡提取15min,5000r/min离心5min。取上层5mL丙酮于40℃氮吹至近干,用20mmol/L乙酸铵的水溶液定容至1mL,再加入1mL正己烷,旋涡振荡。静置分层,取下层水溶液过滤膜,立即进行液相分析。
1.4 液相色谱条件
色谱柱:Nucleosil100-5CN,250mm×416mm(i.d.),5μm;柱温:25℃;流速:0.8mL/min;等度洗脱:20mmol/L乙酸铵的水溶液-乙腈(体积比80∶20);检测波长:245nm;进样量:10μL。

2 结果与讨论
2.1 萃取溶剂的选择
偶氮甲酰胺极性较强,易溶于二甲亚砜和N,N-二甲基甲酰胺,微溶于水、醇和丙酮等有机试剂。二甲亚砜和N,N-二甲基甲酰胺虽然对偶氮甲酰胺溶解度高,但其保留时间与偶氮甲酰胺相似,会产生干扰。同时二者不易挥发,不易通过挥发除去干扰,故不适合作为提取溶剂。若用水提取,面粉中的水溶性成分也会对偶氮甲酰胺的分析造成干扰。甲醇、乙腈等作为提取溶剂所得的水溶性杂质较多,也不适合作为提取溶剂。经过比较,以丙酮作为提取溶剂,可满足微量偶氮甲酰胺的提取要求,且所提取干扰杂质较少。因此本实验选用丙酮作为萃取溶剂。
2.2 净化方法的选择及优化
面粉的丙酮提取液在浓缩后,分别用2种提取液定容以萃取偶氮甲酰胺,同时加入正己烷脱脂。实验比较了水-乙腈(体积比2∶8,下同)和水2种提取液,结果发现用水-乙腈(2∶8)所得谱图在偶氮甲酰胺出峰处有明显干扰,而用水提取所得HPLC谱图无干扰。因此本方法使用纯水作为萃取溶剂,同时使用正己烷除去脂质的干扰。
2.3 提取液稳定性研究
提取液中偶氮甲酰胺的稳定性对实验结果有很大影响。以加标50mg/kg面粉为研究对象,丙酮为溶剂提取偶氮甲酰胺,在室温(约20℃)条件下,于24h内测定提取液峰面积,考察其稳定性曲线。结果表明,所得提取物在20℃条件下, 偶氮甲酰胺提取液于24h内稳定。
2.4 液相色谱条件的优化
2.4.1 液相色谱柱的选择 偶氮甲酰胺在C18色谱柱上几乎没有保留,曾尝试庚烷磺酸钠、十二烷基磺酸钠等离子对试剂,都无法推迟其出峰时间。因此本实验采用对极性物质有一定保留的氰基柱作为分析柱,其保留时间约5.0~6.0min,满足分析需要。
2.4.2 流动相的选择 本实验以不同比例的乙腈与20mmol/L乙酸铵作流动相等度洗脱,结果发现,乙腈与20mmol/L乙酸铵体积比为2∶8时, 既能与面粉中干扰杂质分离,同时不会受二甲基甲酰胺及丙酮色谱峰的干扰,分离效果较为满意(出峰时间5.5min),如图1。
2.5 方法的线性范围、检出限与定量下限
逐级稀释偶氮甲酰胺标准工作液进行HPLC分析,回归方程为y=19.7742x-1.0069(y为峰面积,x为偶氮甲酰胺的质量浓度,mg/L),线性范围为0~50mg/L,r=1.000,定量下限为1.0mg/kg(S/N>10)。
2.6 检测方法精密度与回收率
选择面粉为基质,分别添加1.0、2.0、50.0mg/kg3个水平的偶氮甲酰胺标准品,每个加标水平平行测定10次。实验结果表明,方法的平均回收率在80~92%之间,方法的相对标准偏差小于7%,满足日常检测需要。空白及加标液相色谱图见图1。
2.7 深圳市售面粉中偶氮甲酰胺的普查
从深圳各大型购物商场购买39份不同产地面粉进行分析,均未发现含有偶氮甲酰胺。
参考文献
[1] 凌关庭,唐述潮,陶民强.食品添加剂手册[M].3版.北京:化学工业出版社,2004:917
[2] 王远成,任凌云,周晓邑,等.偶氮甲酰胺对面粉粉质及面包质量的影响[J].粮食与饲料工业,2000,4:7~9
[3] ADAM B,BENJAM IN P Y L,DAV ID L,et al.Semicarbazide formation in azodicarbonamide-treated flour.A model study[J].J Agric Food Chem,2004,52:5730~5734

(责任编辑:admin)
顶一下
(2)
100%
踩一下
(0)
0%
------分隔线----------------------------
发表评论
请自觉遵守互联网相关的政策法规,严禁发布色情、暴力、反动的言论。
评价:
表情:
验证码:点击我更换图片
发布者资料
粮工 查看详细资料 发送留言 加为好友 用户等级:高级会员 注册时间:1970-01-01 08:01 最后登录:2011-12-27 16:12
栏目列表
推荐内容